SARS-CoV-2 검출을위한 RT-PCR 테스트의 외부 동료 검토에 따르면 분자 및 방법 론적 수준에서 10 가지 필수 과학적 단점이 있습니다. 위양성 결과에 대한 결과.

친애하는 독자 여러분, 오늘은 Albert Einstein 교수의 인용문으로 시작하겠습니다.11 년 1943 월 XNUMX 일 United Jewish Appeal 라디오 방송에서):

"진리와 지식을 추구하는 것은 사람이 할 수있는 가장 아름다운 일 중 하나입니다. 비록이 추구에 대한 자부심이 대부분 그러한 추구로 가득하지 않은 사람들의 입술에 있더라도 말입니다.

세계는 거의 XNUMX 년 동안 코로나 고용. 상황을 통제하기 위해 많은 조치가 취해졌습니다. DTT Science-Tank 팀의 우리는 코로나 전염병의 주제를 다루지 않았습니다. 그 이유는 아주 간단합니다. 주제에 대한 과학적 의견을 형성하려면 특히 과학 분야에서 건전하고 존중하는 논쟁이 필요합니다. 훌륭한 과학자들은 항상 그렇게했습니다. 양자 물리학의 역사와 과학자들 간의 다양한 전설적인 불화를 살펴보면 과학이 어떻게 작동하는지 알게됩니다. 불행히도 현재에 일어났다 코로나 위기 지금까지 적절한 분쟁에 지치지 않았습니다.

이 시점에서 정부의 다양한 조치의 기초가 PCR 검사 말하다.

2019 년 초에 발표 된 작업 : 실시간 RT-PCR을 통한 2019 년 신종 코로나 바이러스 (2019-nCoV) 탐지 -여기에서 찾을 수 있습니다 (https://www.eurosurveillance.org/content/10.2807/1560-7917.ES.2020.25.3.2000045)

저자:

Victor M Corman, Olfert Landt, Marco Kaiser, Richard Molenkamp4, Adam Meijer, Daniel KW Chu6, Tobias Bleicker1, Sebastian Brünink, Julia Schneider, Marie Luisa Schmidt1, Daphne GJC Mulders4, Bart L Haagmans, Bas van der Veer, Sharon van den Brink , Lisa Wijsman, Gabriel Goderski, Jean-Louis Romette, Joanna Ellis, Maria Zambon, Malik Peiris, Herman Goossens, Chantal Reusken, Marion PG Koopmans, Christian Drosten   

알려져 있습니다. 그것은 공연의 주요 계기였으며 아마도 여전히 그렇습니다. PCR 검사.

작업의 세부 사항에 들어 가지 않고 하나에 들어가고 싶습니다 보고서 검토 주의를 끌기 위해 :

이미지 출처 : Pixabay

SARS-CoV-2를 검출하기위한 RTPCR 테스트의 외부 동료 검토 결과 분자 및 방법 론적 수준에서 10 가지 주요 과학적 결함이 밝혀졌습니다 : 위양성 결과에 대한 결과 -여기에서 찾을 수 있습니다 (https://cormandrostenreview.com/report/)      

저자 :

Pieter Borger, Bobby Rajesh Malhotra, Michael Yeadon, Clare Crai, Kevin McKernan, Klaus Steger, Paul McSheehy, Lidiya Angelova, Fabio Franchi, Thomas Binder, Henrik Ullrich, Makoto Ohashi, Stefano Scoglio, Marjolein Dosburg-van Kleffens, Dorothea Gilbert Klement, Ruth Schruefer, Berber W. Pieksma, Jan Bonte, Bruno H. Dalle Carbonare, Kevin P. Corbett, Ulrike Kämmerer             

      
이 기사는 리뷰의 핵심 사항을 독일어로 번역 한 것입니다.https://cormandrostenreview.com/report/):

SARS-CoV-2 검출을위한 RT-PCR 테스트의 외부 동료 검토에 따르면 분자 및 방법 론적 수준에서 10 가지 필수 과학적 단점이 있습니다. 위양성 결과에 대한 결과.

제목이 "실시간 RT-PCR을 통한 2019 년 신종 코로나 바이러스 (2019-nCoV) 탐지"(Eurosurveillance 25 (8) 2020) 저자는 2019-nCoV (현재는 다음으로 알려짐)의 탐지 및 진단을위한 진단 워크 플로우 및 RT-qPCR 프로토콜을 제공합니다. 사스-CoV-2) 검증되고 공중 보건 실험실에서 사용하기위한 강력한 진단 방법론을 제공한다고 주장합니다. 전 세계 사회에이 간행물의 결과를 고려하여 독립적 인 연구자 그룹이 위 간행물에 대한 일대일 검토를 수행했습니다.

1) 제시된 테스트 디자인의 모든 구성 요소가 교차 점검되었습니다.

2) RT-qPCR 프로토콜 권장 사항 좋은 실험실 관행을 위해 평가되었습니다

싶게

3) 해당 분야의 관련 과학 문헌을 사용하여 매개 변수를 조사했습니다.

출판 RT-qPCR 프로토콜 2019-nCoV의 탐지 및 진단을 위해 원고에는 부적절한 프라이머 디자인, 문제가 있고 부적절한 것을 포함하여 수많은 기술적 및 과학적 오류가 있습니다. RT-qPCR 프로토콜 그리고 정확한 테스트 검증. 제시된 시험이나 원고 자체가 허용되는 과학 출판에 대한 요구 사항을 충족하지 않습니다. 또한 저자의 심각한 이해 상충은 언급되지 않았습니다. 마지막으로, 출판물 제출과 수락 사이의 매우 짧은 시간 (24 시간)은 체계적인 동료 검토 프로세스 여기에서 수행되지 않았거나 문제가있는 품질이 좋지 않습니다. 우리는 몇 가지 과학적 부적절함에 대한 설득력있는 증거를 제공합니다. 결함 및 결함.

여기에 제시된 과학적 및 방법 론적 단점을 고려할 때, 우리는 유로 감시 출판 할 수밖에 없다 철수하다.

종이에서 발견 된 결함의 요약 카탈로그

Das Corman-Drosten 종이 다음과 같은 특정 오류가 있습니다.

1.이 프로토콜에서 이러한 매우 높은 농도의 프라이머를 사용하는 특정한 이유는 없습니다. 설명 된 농도는 증가 된 비특이적 결합 및 PCR 산물 증폭으로 이어져 SARS-CoV-2 바이러스 검출을위한 특정 진단 도구로 검사가 적합하지 않게 만듭니다.

2. 2 개의 지정되지 않은 흔들리는 위치는이 테스트의 실제 실험실 구현에서 엄청난 변동성을 초래합니다. Corman-Drosten 논문의 혼란스럽고 구체적이지 않은 설명은 표준 작업 프로토콜로 적합하지 않아서 SARS-CoV-XNUMX 바이러스를 식별하기위한 특정 진단 도구로 테스트가 적합하지 않습니다.

3. 검사는 전체 바이러스와 바이러스 조각을 구분할 수 없습니다. 따라서이 검사는 온전한 (감염성) 바이러스에 대한 진단 도구로 사용할 수 없습니다. 즉, 검사가 SARS-CoV-2 바이러스를 식별하기위한 특정 진단 도구로 적합하지 않으며 바이러스 감염 여부에 대한 결론을 도출 할 수 있습니다. 감염.

4. 프라이머 쌍 10 (RdRp_SARSr_F 및 RdRp_SARSr_R)에 대한 어닐링 온도 Tm과 관련하여 1 ° C의 차이는 테스트가 SARS-CoV-2 바이러스를 식별하기위한 특정 진단 도구로 적합하지 않게 만듭니다.

5. 치명적 오류는 샘플이 양수와 음수로 간주되는 Ct 값이 없다는 것입니다. 이 Ct 값은 후속 응용 프로그램에서도 찾을 수 없으므로 테스트가 SARS-CoV-2 바이러스를 탐지하기위한 특정 진단 도구로 적합하지 않습니다.

6. PCR 산물은 분자 수준에서 검증되지 않았습니다. 이로 인해 프로토콜을 SARS-CoV-2 바이러스 탐지를위한 특정 진단 도구로 사용할 수 없습니다.

7. PCR 검사에는 SARS-CoV-2에 대한 특이성을 평가하기위한 명확한 양성 대조군이나 다른 코로나 바이러스의 존재를 배제하기위한 음성 대조군이 포함되어 있지 않으므로이 검사는 SARS-CoV-2를 식별하기위한 특정 진단 도구가됩니다. . 바이러스는 부적합합니다.

8. Corman-Drosten 논문의 테스트 디자인은 너무 모호하고 결함이있어서 수십 가지 다른 방향으로 갈 수 있습니다. 표준화 된 것은 없으며 SOP도 없습니다. 이로 인해 검사의 과학적 타당성이 문제가되며 SARS-CoV-2 바이러스를 식별하기위한 특정 진단 도구로 적합하지 않습니다.

9. Corman-Drosten 논문은 동료 심사를 거치지 않았기 때문에 SARS-CoV-2 바이러스를 식별하기위한 특정 진단 도구로는 적합하지 않습니다.

10. Corman-Drosten 논문의 저자 중 29 명 (Christian Drosten 및 Chantal Reusken)이 Eurosurveillance 편집위원회의 구성원이라는 사실 외에도 최소 2020 명의 저자에게서 심각한 이해 상충을 발견했습니다. 20 년 21 월 XNUMX 일에 이해 상충이 추가되었습니다 (Olfert Landt는 TIB-Molbiol의 전무 이사이고 Marco Kaiser는 GenExpress의 선임 연구원이며 TIB-Molbiol의 과학 고문 역할을 함) 원래 버전에서는 선언되지 않았습니다. PubMed에서 -Version이 아직 없습니다. TIB-Molbiol은 Corman-Drosten 원고에 게시 된 프로토콜을 기반으로 PCR 키트 (Light Mix)를 "최초로"생산 한 회사로, 자체적으로 이러한 PCR 테스트 키트를 출판하기 전에도 판매했습니다 [XNUMX ]; 또한 Victor Corman과 Christian Drosten은 두 번째 계열사 인 상업 테스트 실험실 "Labor Berlin"에 대해 언급하지 않았습니다. 둘 다 그곳에서 바이러스 진단을 담당하고 있으며 [XNUMX] 회사는 실시간 PCR 테스트 분야에서 활동하고 있습니다.

결론

어떤 테스트 프로토콜을 게시하고 일반적으로 액세스 할 수 있는지에 대한 결정은 Eurosurveillance에 있습니다. Corman-Drosten 연구에서 명백한 오류를 인식하는 결정은 미래에 사람들의 비용과 고통을 크게 최소화 할 수 있다는 이점이 있습니다.
이 문서를 철회하는 것이 Eurosurveillance의 최선의 이익이 아닙니까? 우리의 결론은 분명합니다. 여기에 설명 된 모든 엄청난 PCR 프로토콜 설계 결함과 결함을 감안할 때, 우리는 과학적 무결성과 책임의 틀 안에 많은 선택권이 남아 있지 않다는 결론을 내립니다.

[1] Corman Victor M, Landt Olfert, Kaiser Marco, Molenkamp Richard, Meijer Adam, Chu Daniel KW, Bleicker Tobias, Brünink Sebastian, Schneider Julia, Schmidt Marie Luisa, Mulders Daphne GJC, Haagmans Bart L, van der Veer Bas, van den Brink Sharon, Wijsman Lisa, Goderski Gabriel, Romette Jean-Louis, Ellis Joanna, Zambon Maria, Peiris Malik, Goossens Herman, Reusken Chantal, Koopmans Marion PG, Drosten Christian. 실시간 RT-PCR을 통한 2019 년 신종 코로나 바이러스 (2019-nCoV) 탐지. 유로 감시. 2020; 25 (3) : pii = 2000045. https://doi.org/10.2807/1560-7917.ES.2020.25.3.2000045

[2] Dr. Peter Borger & Dr. Adam Meijer : 보충 자료

[3] Jafaar et al., 3790 년 중증 급성 호흡기 증후군 코로나 바이러스 1941 분리 물을 포함하여 2 정량 중합 효소 연쇄 반응 – 양성 샘플 및 양성 세포 배양 간의 상관 관계. https://academic.oup.com/cid/advance-article/doi/10.1093/cid/ciaa1491/5912603

[4] BBC, 21 년 2020 월 51185836 일 : https://www.bbc.com/news/world-asia-china-XNUMX;
자료실 : https://archive.is/0qRmZ

[5] Google Analytics-전 세계 COVID19 사망 : https://bit.ly/3fndemJ
자료실 : https://archive.is/PpqEE

[6] COVID-19 긴급 대응 기술 센터, NIVD 실험실 테스트
중국 CDC 15 년 2020 월 XNUMX 일 : http://www.chinacdc.cn/en/COVID19/202003/P020200323390321297894.pdf

[7] Real-Time PCR 핸드북 Life Technologies : https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/global/Forms/PDF/real-time-pcr-
handbook.pdf Nolan T, Huggett J, Sanchez E. 정량적 PCR (qPCR) 적용을위한 우수 사례 가이드 2013 년 초판

[8] Trestan Pillonel et al, 편집자에게 보내는 편지 : 실시간 RT-PCR에 의한 SARS-CoV-2 탐지 : https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7268274/

[9] Kurkela, Satu 및 David WG Brown. "분자 진단 기술." 의학 38.10
(2009) : 535 - 540.

[10] Wolfel et al., COVID-2019 입원 환자의 바이러스 학적 평가
https://www.nature.com/articles/s41586-020-2196-x

[11] Thermofischer Primer Dimer 웹 도구 : https://www.thermofisher.com/us/en/home/brands/thermo-scientific/molecular-biology/molecular-biology-learning-center/molecular-biology-resource-library /thermo-scientific-web-tools/multiple-primer-analyzer.html

[12] Primer-BLAST, NCBI-국립 생명 공학 정보 센터 : https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/

Marra MA, Steven JMJ, Caroline RA, Robert AH, Angela BW et al. (13) 과학. SARS 관련 코로나 바이러스의 게놈 서열. Science 2003 (300) : 5624-1399.

[14] 중증 급성 호흡기 증후군 코로나 바이러스 2 분리 된 Wuhan-Hu-1, 완전한 게놈 : https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/MN908947

Borger P. SARS와 유사한 코로나 바이러스가 예상되었지만 대비할 수있는 조치는 없습니다. J Biomed Sci Res 15에서. https://biomedgrid.com/pdf/AJBSR.MS.ID.2020.pdf
https://www.researchgate.net/publication/341120750_A_SARS-like_Coronavirus_was_Expected_but_nothing_was_done_to_be_Prepared;  아카이브 : https://archive.is/i76Hu

[16] Eurosurveillance 논문 평가 / 검토 프로세스 : https://www.eurosurveillance.org/evaluation

[17] WHO의 Corman-Drosten 프로토콜 및 원고에 대한 공식 추천, 13 년 2020 월 1.0 일 문서 버전 XNUMX으로 게시 : https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/wuhan-virus -시험-
v1991527e5122341d99287a1b17c111902.pdf; archive: https://bit.ly/3m3jXVH

[18] Corman / Drosten RT-qPCR- 프로토콜에 대한 공식 WHO 권장 사항. Eurosurveillance- 출판, 문서 버전 2-1에서 직접 파생 됨
17th January 2020: https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/protocol-v2-1.pdf?sfvrsn=a9ef618c_2

[19] Eurosurveillance 편집위원회, 2020 : https://www.eurosurveillance.org/upload/site-assets/imgs/2020-09-Editorial%20Board%20PDF.pdf; 아카이브 : https://bit.ly/2TqXBjX

[20] LightMix SarbecoV E-gene plus EAV Control, TIB-Molbiol & Roche Molecular Solutions 사용 지침, 11 년 2020 월 40 일 : https://www.roche-as.es/lm_pdf/MDx_0776-96_200204_Sarbeco-E-gene_V09164154001_1 (XNUMX ) .pdf
아카이브, 타임 스탬프-11 년 2020 월 XNUMX 일 : https://archive.is/Vulo5;  자료실 : https://bit.ly/3fm9bXH [21] 베를린 노동부에서 바이러스 진단을 담당하는 Christian Drosten & Victor Corman :
https://www.laborberlin.com/fachbereiche/virologie/  아카이브 : https://archive.is/CDEUG

[22] Tom Jefferson, Elizabeth Spencer, Jon Brassey, Carl Heneghan 바이러스 배양에 대한 COVID-19 감염성 평가. 체계적인 검토. 체계적인 검토 doi : https://doi.org/10.1101/2020.08.04.20167932-XNUMX-XNUMX-XNUMX https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.08.04.20167932v4

Kim et al., The Architecture of SARS-CoV-23 Transcriptome : https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2

[24] Dr. Peter Borger, 18 년 2020 월 XNUMX 일 : 보충 자료

[25] Dr. Ulrike Kämmerer 및 팀, 설문 조사 및 Primer-BLAST 테이블